神经生长因子p75受体与sortilin在皮肤及瘢痕成纤维细胞中的表达

doi:10.3969/j.issn.2095-4344.2013.28.016

中国组织工程研究 ›› 2013, Vol. 17 ›› Issue (28): 5198-5203.doi: 10.3969/j.issn.2095-4344.2013.28.016

• 组织构建与生物活性因子 tissue construction and bioactive factors • 上一篇下一篇

神经生长因子p75受体与sortilin在皮肤及瘢痕成纤维细胞中的表达

冯璋¹，张芮²，冯永强¹，周一冲¹，王一兵¹

1山东大学附属省立医院烧伤整形科，山东省济南市 250021；
2山东医学高等专科学校病理与病理生理教研室，山东省济南市 250002

出版日期:2013-07-09 发布日期:2013-07-09
通讯作者: 王一兵，博士，教授，主任医师，博士生导师，山东大学附属省立医院烧伤整形科，山东省济南市 250021 wyb0616@163.com
作者简介:冯璋，男，1986年生，山东省滕州市人，汉族，山东大学医学院毕业，硕士，主要从事烧伤整形外科创面愈合基础研究。 fengzhang512@126.com
基金资助:
国家自然科学基金资助项目(81171818)
济南科技局课题(201102074)

Expression of nerve growth factor p75 receptor and sortilin in the skin fibroblasts and scar fibroblasts

Feng Zhang¹, Zhang Rui², Feng Yong-qiang¹, Zhou Yi-chong¹, Wang Yi-bing¹

1Department of Burns and Plastic Surgery, Shandong Provincial Hospital, Shandong University, Jinan 250002, Shandong Province, China;
2Department of Pathology and Pathophysiology, Shandong Medical College, Jinan 250002, Shandong Province, China

Online:2013-07-09 Published:2013-07-09
Contact: Wang Yi-bing, M.D., Professor, Chief physician, Doctoral supervisor, Department of Burns and Plastic Surgery, Shandong Provincial Hospital, Shandong University, Jinan 250002, Shandong Province, China wyb0616@163.com
About author:Feng Zhang, Master, Department of Burns and Plastic Surgery, Shandong Provincial Hospital, Shandong University, Jinan 250002, Shandong Province, China fengzhang512@126.com
Supported by:
National Natural Science Foundation of China, No. 81171818*;
Projects of Jinan Science and Technology Bureau, No. 201102074*

摘要/Abstract

摘要：

背景：既往研究发现神经生长因子在创面愈合过程中发挥重要作用，但对于成纤维细胞中神经生长因子低亲和力受体p75及sortilin的研究较少，p75及sortilin在瘢痕组织成纤维细胞及正常皮肤组织成纤维细胞中的表达量是否有差异目前未见报道。

目的：比较神经生长因子低亲和力受体p75及soritilin在瘢痕疙瘩成纤维细胞及正常皮肤成纤维细胞的中表达的差异。

方法：体外培养瘢痕疙瘩成纤维细胞及正常皮肤成纤维细胞，并以人永生化上皮细胞HaCaT为阳性对照。通过实时定量PCR在mRNA水平检测p75及sortilin在瘢痕疙瘩成纤维细胞及正常皮肤成纤维细胞的表达及差异，进一步通过Western-blot及细胞免疫化学方法观察p75神经营养因子受体及sortilin在蛋白水平的表达及差异。

结果与结论：实时定量PCR及Western blot结果可见，在mRNA及蛋白水平瘢痕疙瘩成纤维细胞及正常皮肤成纤维细胞中p75，sortilin均呈阳性表达，其中瘢痕疙瘩成纤维细胞及正常皮肤成纤维细胞中p75及sortilin在mRNA及蛋白水平表达量明显少于HaCaT，且p75在瘢痕疙瘩成纤维细胞及正常皮肤成纤维细胞中表达差异无显著性意义，sortilin表达量在瘢痕疙瘩成纤维细胞中明显低于正常皮肤成纤维细胞(P < 0.05)。免疫细胞化学结果显示p75及sortilin在瘢痕疙瘩成纤维细胞及正常皮肤成纤维细胞中的表达部位均位于胞膜及胞浆。由于神经生长因子前体与p75受体高亲和力结合并在sortilin协助下发挥促进细胞凋亡的作用，sortilin在瘢痕成纤维细胞的表达明显低于正常皮肤成纤维细胞，可能与其高增殖状态有关，该结果为病理性瘢痕的防治提供了新的靶点。

关键词: 组织构建, 组织构建与生物活性因子, 神经生长因子低亲和力受体, sortilin, 瘢痕疙瘩成纤维细胞, 正常皮肤成纤维细胞, HaCaT, 实时定量PCR, Western-blot, 国家自然科学基金

Abstract:

BACKGROUND:Previous studies have found that nerve growth factors play an important role in the process of wound healing, but there is less research for the low-affinity nerve growth factor receptor p75 and sortilin in fibroblasts, and no reports on whether there are differences in expression of p75 and sortilin in the scar fibroblasts and normal skin fibroblasts.

OBJECTIVE: To study the expression of low-affility nerve growth factor receptor p75 and sortilin in the normal human skin fibroblasts and the human keloid fibroblasts.

METHODS: The keloid fibroblasts and normal hunman skin fibroblasts were cultured in vitro, and the immortalized epithelial cells HaCaT were used as the positive control. The real-time PCR was used to detect the mRNA expression of the p75 and sortilin in the keloid fibroblasts and normal human skin fibroblasts, and western blot and immunocytochemical staining were used to detect the protein expression of p75 and sortilin.

RESULTS AND CONCLUSION: The real-time PCR and western blot results showed that in the protein and mRNA levels, p75 and sortilin showed positive expression in the keloid fibroblasts and normal human skin fibroblasts, and there was no significant difference in the expression of p75 between keloid fibroblasts and normal human skin fibroblasts, and the expressions of p75 and sortilin in the keloid fibroblasts and normal human skin fibroblasts were significantly lower than those in HaCaT. There was no significant difference of p75 expression between keloid fibroblasts and normal human skin fibroblasts, and the expression of sortilin in the keloid fibroblasts was significantly lower than that in the normal human skin fibroblasts (P < 0.05). Immunocytochemical staining result showed that the expression of p75 and sortilin in the keloid fibroblasts and normal human skin fibroblasts were distributed in the membrane and cytoplasm. Precursor nerve growth factor combined with high-affinity p75 receptor could promote the apoptosis of the cells with the help of sortilin, and the expression of sortilin in the keloid fibroblasts was significantly lower than that in the normal human skin fibroblasts, which may associated with the high proliferation of the keloid fibroblasts. The results provide a new target for the prevention and treatment of pathological scars.

Key words: tissue construction, tissue construction and bioactive factors, low-affinity nerve growth factor receptor, sortilin, keloid fibroblast, normal skin fibroblasts, HaCaT, real-time PCR, western blot, National Natural Science Foundation of China

中图分类号:

R318

冯璋，张芮，冯永强，周一冲，王一兵. 神经生长因子p75受体与sortilin在皮肤及瘢痕成纤维细胞中的表达[J]. 中国组织工程研究, 2013, 17(28): 5198-5203.

Feng Zhang, Zhang Rui, Feng Yong-qiang, Zhou Yi-chong, Wang Yi-bing. Expression of nerve growth factor p75 receptor and sortilin in the skin fibroblasts and scar fibroblasts[J]. Chinese Journal of Tissue Engineering Research, 2013, 17(28): 5198-5203.

图/表（结果） 3

参考文献

[1]Nykjaer A, Lee R, Teng KK, et al. Sortilin is essential for proNGF-induced neuronal cell death. Nature. 2004; 427: 843-848.

[2]Cohen-Cory S, Dreyfus CF, Black IB.Expression of high- and low-affinity nerve growth factor receptors by Purkinje cells in the developing rat cerebellum. Exp Neurol. 1989;105(1):104-109.

[3]Teng KK, Felice S, Kim T. Understanding proneurotrophin actions: Recent advances and challenges.Dev Neurobiol. 2010;70(5):350-359.

[4]Hempstead BL. Dissecting the diverse actions of pro- and mature neurotrophins. Curr Alzheimer Res. 2006;3(1):19-24.

[5]Yaar M, Grossman K, Eller M, et al. Evidence for nerve growth factor-mediated paracrine effects in human epidermis. J Cell Biol. 1991;115(3):821-828.

[6]Kristensen M, Chu CQ, Eedy DJ, et al. Localization of tumor necrosis factor-alpha (TNF-alpha) and its receptors in normal and psoriatic skin: epidermal cells express the 55-kD but not the 75-kD TNF receptor. Clin Exp Immunol. 1993;94(2):354-362.

[7]López SM, Pérez-Pérez M, Márquez JM, et al. p75 and TrkA neurotrophin receptors in human skin after spinal cord and peripheral nerve injury, with special reference to sensory corpuscles. Anat Rec. 1998;251(3):371-383.

[8]Johansson O, Liang Y, Emtestam L. Increased nerve growth factor- and tyrosine kinase A-like immunoreactivities in prurigo nodularis skin-an exploration of the cause of neurohyperplasia. Arch Dermatol Res. 2002;293(12):614-619.

[9]Dou YC, Hagstromer L, Emtestam L, et al. Increased nerve growth factor and its receptors in atopic dermatitis: an immunohistochemical study. Arch Dermatol Res. 2006;298(1): 31-37.

[10]Petersen CM, Nielsen MS, Nykjaer A, et al. Molecular identification of a novel candidate sorting receptor purified from human brain by receptor-associated protein affinity chromatography. J Biol Chem. 1997;272(6):3599-3605.

[11]Al-Shawi R, Hafner A, Olsen J, et al. Neurotoxic and neurotrophic roles of proNGF and the receptor sortilin in the adult and ageing nervous system. Eur J Neurosci. 2008;27(8): 2103-2114.

[12]Kiss M, Dallos A, Kormos B, et al. Sortilin is expressed in cultured human keratinocytes and is regulated by cutaneous neuropeptides. J Invest Dermatol. 2010;130(11):2553-2560.

[13]Peters EM, Stieglitz MG, Liezman C. p75 Neurotrophin Receptor-Mediated Signaling Promotes Human Hair Follicle Regression (Catagen). Am J Pathol. 2006;168(1):221-234.

[14]Botchkarev VA, Yaar M, Peters EM, et al. Neurotrophins in skin biology and pathology. J Invest Dermatol. 2006;126:1719-1727.

[15]司徒振强,吴军正.细胞培养[M].西安：世界图书出版西安公司,1996.

[16]黎鳌. 黎鳌烧伤学[M]. 上海：上海科学技术出版社,2001：1-26.

[17]付小兵.软组织创伤修复与再生研究的发展方向[J].创伤外科杂志, 2004, 6(3) : 237-239.

[18]李霞,张芮,冯永强,等.烧伤患者Ⅲ度创面不同时期神经形态学观察[J]. 中华烧伤杂志, 2008,24(6):441-442.

[19]李霞,张芮,冯永强,等.增生期和成熟期皮肤瘢痕中的神经纤维形态学观察[J]. 山东大学学报,2008,46(7):725-729.

[20]Feng YQ, Li X,Zhang R, et al. Remodeling of skin nerve fibers during burn wound healing. Neural Regen Res. 2010;5(19): 1515-1520.

[21]Tan L, Hatzirodos N,Wormald PJ.Effect of nerve growth factor and keratinocyte growth factor on wound healing of the sinus mucosa. Wound Repair Regen. 2008;16(1):108-116.

[22]Gan H, Xie H, Chen X,et al.Effects of NGF on proliferation, mitotic cycle, collagen synthesis and migration of human dermal fibroblasts in vitro. Zhongguo Xiu Fu Chong Jian Wai Ke Za Zhi. 2009;23(11):1350-1354.

[23]陈伟,付小兵,葛世丽,等. 瘢痕疙瘩和正常皮肤组织中基因表达的变化[J].解放军医学杂志,2004,29(8):655-657.

[24]杨东运,李世荣,李荟元. 神经生长因子对瘢痕组织中炎性细胞及胶原沉积的影响[J]. 第三军医大学学报,2000,22(11): 1090-1092.

[25]Kaplan DR, Hempstead BL, Martin-Zanca D, et al. The trk proto-oncogen product: a signal transducing receptor for nerve growth factor. Science. 1991;252(5005):554-558.

[26]Ethell IM, Ethell DW. Matrix metalloproteinases in brain development and remodeling: Synaptic functions and targets. J Neurosci Res. 2007;85(13):2813-2823.

[27]Segal RA. Selectivity in neurotrophin signaling: theme and variations. Annu Rev Neurosci. 2003;26:299-330.

[28]Lee R, Kermani P, Teng KK, et al.Regulation of cell survival by secreted proneurotrophins. Science. 2001;294(5548):1945-1948.

[29]Stoica G,Lungu G,Kim HT,et al. Up-regulation of pro-nerve growth factor,neurotrophin receptor p75,and sortilin is associated with retrovirus-induced spongiform encephalomyelopathy.Brain Res. 2008;1208:204-216.

[30]Hempstead BL. Commentary: Regulating proNGF action:multiple targets fortherapeutic intervention. Neurotox Res. 2009;16(3):255-260.

[31]Jansen P,Giehl K,Nyengaard JR,et al.Roles for the pro-naurotrophiIl receptor sortilin in neuronal development,aging and brain injury. Nat Neurosei. 2007;10(11):1449-1457.

[32]AI-Shawi R,Hafner A.Neurotoxic and neurotrophic roles of proNGF and the receptor sortilin in the adult and ageing nervous system.Eur J Nenrosci.2008;27(8):2103-2114.

[33]Nykjaer A,Lee R,Teng KK, et al. Sortilin is essential for proNGF-induced neuronal cell death. Nature. 2004;427: 843-848.

[34]韩玉梁, 鲍刚, 郭世文, 等. 人脑出血后proNGF、sortilin胞凋亡的关系的表达及与细胞凋亡的关系[J]. 中华神经外科疾病研究杂志,2009;8(6):517-520.

[35]Schweigreiter R. The dual nature of neurotrophins. Bioessays. 2006;28(6) : 583-594.

[36]Wang YB, Guo PF. Skin nerve regeneration and burn wound healing following spinal nerve root incision. Neural Regen Res. 2011;6(8):570-574.

引言

在创面愈合过程中如何减轻瘢痕增生是目前烧伤治疗的主要任务，在既往研究中发现神经因素在创面修复过程中起到非常重要的作用。神经生长因子是最重要的神经营养因子，不仅具有促进神经系统发育及分化、维持神经系统正常功能、调节神经肽等多方面的作用, 同时还具有能够促进伤口的愈合、参与血管发生等方面的作用^[1]。而神经生长因子主要通过2种受体发挥生物学作用，即高亲和力受体TrkA和低亲和力受体p75^[2]。正常情况下皮肤组织细胞能分泌神经生长因子，并表达p75/TrkA 2种受体。在多种损伤组织及修复组织中神经生长因子及其特异性受体(TrkANGFR, P75NGFR)都改变。与其他分泌性蛋白类似，神经生长因子首先以其前体的形式合成，然后在各种蛋白酶的作用下裂解为成熟神经生长因子。原来认为神经生长因子前体没有生物作用，近来研究发现神经生长因子前体可以与p75神经营养因子受体高亲和力结合引起细胞凋亡^[3-4]，当存在辅助受体sortilin时，神经生长因子前体与p75神经营养因子受体的亲和力增加。神经营养因子受体p75是神经营养因子的低亲和力受体，M_r 75 000，属于肿瘤坏死因子受体超家族的成员之一，广泛分布于神经系统及众多非神经系统的组织及肿瘤细胞中^[5-9]，目前发现神经生长因子前体可与其高亲和力结合。Sortilin 又称为神经降压素受体3^[10]，是一个M_r 95 000的典型的Ⅰ型膜糖蛋白，是已知的第一个不属于G-蛋白偶联受体超家族的跨膜神经肽受体，神经生长因子前体与p75高亲和力结合后在sortilin辅助下，可以介导引起凋亡^[11]。目前神经生长因子受体在皮肤的研究主要涉及皮肤表皮角质形成细胞、毛囊及黑色素细胞^[12-14]。既往研究已经发现并确定神经生长因子受体在其皮肤细胞上呈阳性表达，神经生长因子前体通过p75介导的细胞凋亡已通过研究证实其在皮肤疾病及毛囊退行性变中的作用，但是p75及sortilin是否在皮肤成纤维细胞中表达，且瘢痕组织成纤维细胞与正常皮肤组织成纤维细胞的表达量是否有差异目前尚未有相关文献报道。由于人永生化表皮细胞HaCaT与正常人表皮细胞生物学特性等较一致，且易培养，因此实验以HaCaT做阳性对照，通过免疫细胞化学、蛋白免疫印迹、实时定量PCR等方法观察p75及sortilin在正常皮肤成纤维细胞及瘢痕疙瘩成纤维细胞中的表达情况。

材料方法

设计：体外细胞学对比观察实验。

时间及地点：实验于2011年12月至2012年8月在山东大学附属省立医院中心实验室完成。

材料：实验中所取标本均来自山东省立医院烧伤整形科临床手术切除的组织，患者年龄10-40岁，其中瘢痕疙瘩10例，正常皮肤7例。瘢痕疙瘩部位为耳垂、腹部、面部等，取皮区无破损、溃疡等，手术前未进行其他治疗；正常皮肤来自整形手术中弃用的多余组织。标本采集前均征得患者本人及其家属知情同意。HaCaT由本院皮肤科惠赠。

实验方法：

成纤维细胞的培养及传代：采用酶消化法培养原代瘢痕成纤维细胞及正常皮肤成纤维细胞，待细胞生长接近单层细胞层时，以0.25%的胰酶消化按1∶3比例传代，实验细胞选用3-5代细胞^[15]。

皮肤及瘢痕成纤维细胞中神经生长因子p75受体与sortilin表达实验的主要试剂及仪器：

荧光定量PCR检测sortilin及p75mRNA表达的检测：已经长满培养瓶的细胞去上清后，PBS冲洗2次，用Trizol试剂一步法(TaKaRa公司)抽提3种细胞总RNA。每份样品取2 μg mRNA，用TaKaRa公司的反转录试剂盒按说明书进行cDNA 的合成。实验所有引物均由Primer3 程序设计，由BLAST (PubMED)鉴定确认，最后由上海生工生物有限公司合成。

β-actin引物：F-5-tga cgt gga cat ccg caa ag-3，R-5-ctg gaa ggt gga cag cga gg-3；

p75引物：F-5-aac aag acc tca tag cca gca-3，R-5-cag gat gga gca ata gac agg-3；

Sortilin引物：F-5-gga caa aga tgc tgg aag ga-3，R- 5-acattgataggacggctgct-3。

按照SYBR Green荧光定量试剂盒进行PCR反应，以β-actin为内参对照，采用Roach480实时定量PCR仪进行SYBR Green荧光定量PCR分析，每个样本重复检测3次。反应条件：95 ℃ 10 min 1个循环，95 ℃ 15 s 40个循环，60 ℃ 1 min 40个循环，结果采用PCR仪随机软件循环阈值(Ct)，2^-ΔΔCt法进行基因相对表达分析，将瘢痕疙瘩成纤维细胞中p75及sortilin基因表达量为参照，计算正常皮肤成纤维细胞及HaCaT中的基因相对表达量。

Western blot检测p75及sortilin在正常皮肤及瘢痕成纤维细胞中的表达：待细胞长满瓶底后收集细胞，以预冷的PBS洗2次，加入100 μL预冷裂解液，冰浴30 min，刮勺收集样本，4 ℃12 000 ×g离心15 min，取上清，以BCA法测定提取蛋白浓度。取20 μL蛋白质经10%SDS-PAGE垂直凝胶电泳后，电转移至PVDF膜上，用丽春红染色观察转移效果，体积分数5%牛血清白蛋白室温封闭1 h后，加入相应的1∶500稀释的兔抗人p75、sortilin单克隆抗体4 ℃过夜，TBST洗膜后，加入1∶2 000辣根过氧化物酶标记的山羊抗兔二抗，室温作用1 h，TBST洗膜后，滴加ECL发光试剂，显影、摄片。

免疫细胞化学方法检测p75及sortilin在瘢痕疙瘩成纤维细胞、正常皮肤成纤维细胞中的表达：细胞爬片, 体积分数95%乙醇固定15 min，体积分数3% H₂O₂阻断内源性过氧化物酶活性30 min，山羊血清封闭15 min，一抗(sortilin或p75 抗体)4 ℃孵育过夜, PBS冲洗, 生物素标记二抗孵育15 min，PBS冲洗，辣根过氧化物酶链霉卵白素工作液37 ℃孵育30 min，PBS冲洗，DAB显色，苏木精复染，乙醇梯度脱水，中性树胶封固。用PBS代替一抗作为阴性对照，HaCat细胞作阳性对照。

主要观察指标：荧光定量PCR实验观察3种细胞中p75 mRNA及sortilin mRNA的相对表达量，Western-blot实验观察3种细胞中p75及sortilin蛋白水平的相对表达量。免疫组织化学方法观察p75及sortilin蛋白在3种细胞中的阳性表达部位。

统计学分析：由第一作者采用SPSS 17.0软件进行统计分析，计量数据以x(_)±s表示，采用配对t 检验分析数据，P < 0.05 为差异有显著性意义。

讨论

如何促进创面愈合、减少瘢痕及其引起的致残率是目前烧伤治疗的主要任务^[16]。创伤愈合涉及急性炎症、细胞增殖、瘢痕形成3个时期，创伤修复受多种因素的调节，其中神经因素在创伤修复过程的作用日益受到重视^[17]。皮肤神经的研究主要分神经构筑以及神经功能两方面。既往对烧伤创面愈合过程中的神经再构筑进行了观察，发现伤后至瘢痕增生期神经数目逐渐增多^[18]。激光共聚焦显微镜下可以看到此期神经纤维粗大，有明显的折痕和局部破损，且分布混乱，而成熟期瘢痕神经纤维趋于规律^[19]。神经容积分数增高、神经肿胀、扭曲提示愈合过程中伤区神经的物理数目或NFP合成增加，而皱褶和出芽则可能是神经再生的直接证据。再生的神经必然对靶组织细胞产生功能。统计学分析表明，烧伤后创面愈合及瘢痕增生过程中，神经容积分数与胶原容积分数的变化具有相关性^[20]。神经主要通过分泌神经生长因子等神经肽对靶组织细胞起作用。神经元、神经支配的靶组织或胶质细胞产生并分泌的神经营养因子，可通过与其相应受体结合而启动效应神经元存活、生长、分化。神经生长因子是最典型的神经营养因子。成纤维细胞是最重要的创伤修复细胞之一。神经生长因子与皮肤成纤维细胞功能之间的关系尚不明确：Tan等^[21]发现神经生长因子虽然能促进鼻窦黏膜愈合，但是降低成纤维细胞的增殖。Gan等^[22]发现神经生长因子只能促进皮肤成纤维细胞的迁移，而对细胞周期、细胞增殖、胶原分泌等情况没有影响。陈伟等^[23]通过基因表达谱芯片技术筛选瘢痕疙瘩发生相关基因时，发现瘢痕疙瘩内的神经生长因子基因表达水平明显高于正常皮肤，提示神经生长因子参与瘢痕疙瘩的形成。杨东运等^[24]通过在大鼠背部注射神经生长因子，发现注射组织中肥大细胞、巨噬细胞增多，胶原密度增加，认为神经生长因子可促进瘢痕形成。以上多个实验表明神经生长因子可促进创面愈合和瘢痕的形成，但这一作用尚有争议。神经生长因子属于神经营养素家族成员，广泛存在于神经系统及非神经系统中，通过作用于2类不同的跨膜受体发挥作用，即p75神经营养因子受体和Trk酪氨酸激酶受体家族(包括TrkA, TrkB和TrkC)^[25]，其他分泌性蛋白类似，神经生长因子首先以其前体的形式合成，并在各种蛋白酶的作用下分解成成熟的神经生长因子^[26]。既往研究发现神经生长因子可与TrKA高亲和力结合促进细胞的增殖及活化^[27]，而p75与神经生长因子结合后则通过其独有的信号传导系统引起细胞凋亡^[28]。原来认为神经生长因子前体没有生物作用，近年来研究发现神经生长因子前体与p75神经营养因子受体高亲和力结合介导细胞凋亡当存在辅助受体sortilin时，神经生长因子前体与p75神经营养因子受体的亲和力增加。在肝纤维化研究中发现体外应用神经生长因子可特异性地诱发肝星形细胞的凋亡。有学者发现肝纤维化初期金属基质蛋白酶MMP-7裂解神经生长因子前体生成成熟神经生长因子，使得神经生长因子前体/成熟神经生长因子平衡发生变化，促进纤维化。神经生长因子前体具有促进细胞凋亡的作用，这种现象在发育的神经系统、创伤后的中枢神经系统、阿尔茨海默病的脑组织、老化的神经组织中都已经被发现^[29-32]。Nykjaer等^[33]研究发现神经生长因子前体通过p75发挥促细胞凋亡的过程中需要sortilin协助形成神经生长因子前体- p75-sortilin配体受体复合物来激活信号传导途径发挥促细胞凋亡作用。韩玉梁等^[34]在研究脑出血细胞凋亡过程中发现血肿周围组织中细胞凋亡增加，其中sortilin的表达水平明显增加与细胞凋亡呈正相关^[35]。神经营养因子前体通过与p75神经营养因子受体和sortilin受体结合形成配体2受体复合物从而介导细胞凋亡。抑制或上调sortilin受体的表达可以降低或增加神经生长因子前体介导的细胞死亡。因此，sotilin受体与p75神经营养因子受体的共同存在决定了p75神经营养因子受体是否作为死亡受体^[35]。 Wang等^[36]研究创面愈合过程中发现随着创面愈合和瘢痕增生，神经纤维的密度先降低、后升高、再降低，形态先简单、后复杂、再规则。这与创面中胶原纤维的变化基本保持一致，说明神经纤维的再支配与创面的修复和瘢痕的转归有密切联系，而神经生长因子是神经细胞分泌的最主要的神经肽，目前研究发现神经生长因子在创面愈合过程中能促进成纤维细胞增殖、迁移、缩短细胞周期，促进胶原分泌。有研究发现在创面上皮化愈合后神经生长因子仍可促进炎性细胞的趋化、活化，促进局部瘢痕组织中胶原的沉积，从而可能在增生性瘢痕的形成中发挥重要作用。由于神经生长因子以前体的形式合成并分泌，是否神经生长因子前体在创面愈合及瘢痕形成过程中发挥生物学作用尚无相关文献报道。目前有研究发现p75介导的信号传导系统在毛囊退行性变过程中发挥作用，有学者研究发现人表皮细胞中表达sortilin及p75，且神经生长因子前体可通过其发挥促凋亡作用。但是皮肤成纤维细胞是否表达p75及sortilin，p75及sortilin在正常成纤维细胞及瘢痕疙瘩成纤维细胞中的表达量是否有差异尚未有相关文献报道。实验通过细胞免疫化学、蛋白免疫印迹、实时定量PCR等证明p75及sortilin在成纤维细胞中呈阳性表达，其中p75在瘢痕成纤维细胞及正常皮肤成纤维细胞中的表达无明显差异，而sortilin在瘢痕成纤维细胞的表达明显低于正常皮肤成纤维细胞的表达。由于病理性瘢痕的发病机制是由于成纤维细胞的过度增殖、胶原蛋白的过多分泌有关，而瘢痕成纤维细胞增殖能力较正常皮肤成纤维细胞明显增加，实验已经证明sortilin在瘢痕成纤维细胞中的表达明显低于正常皮肤成纤维细胞，结合创面愈合过程中神经纤维的变化情况，可以解释瘢痕成纤维细胞凋亡减低及瘢痕增生的机制，为病理性瘢痕的治疗提供了新的靶点。

神经生长因子p75受体与sortilin在皮肤及瘢痕成纤维细胞中的表达

Expression of nerve growth factor p75 receptor and sortilin in the skin fibroblasts and scar fibroblasts

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[1]	赵春涛, 卿明松, 余浪波, 彭笳宸. 运动学对线和机械力学对线指导全膝关节置换效果的Meta分析[J]. 中国组织工程研究, 2020, 24(9): 1435-1442.
[2]	涂鹏程, 郭杨, 马勇, 潘娅岚, 郑苏阳, 王礼宁, 吴承杰, 过俊杰. 威灵仙提取物可促进体外牵张应力环境下软骨细胞表型的维持[J]. 中国组织工程研究, 2020, 24(8): 1182-1187.
[3]	张聪, 赵岩, 杜小宇, 杜欣瑞, 庞廷娟, 付怡凝, 张浩, 张步洲, 李筱贺, 王利东. 青少年特发性脊柱侧凸腰主弯患者腰椎-骨盆的生物力学分析[J]. 中国组织工程研究, 2020, 24(8): 1155-1161.
[4]	许国峰, 李学斌, 唐一钒, 赵寅, 周盛源, 陈雄生, 贾连顺. 人黄韧带细胞骨化发生过程中的自噬[J]. 中国组织工程研究, 2020, 24(8): 1174-1181.
[5]	周玉, 龙小安, 李宁, 王纯. 有限元法分析髌腱炎状态时的生物力学变化[J]. 中国组织工程研究, 2020, 24(8): 1280-1286.
[6]	林明, 潘金勇, 张惠荣. 敲除NIPBL基因可下调小鼠骨髓间充质干细胞增殖及成骨分化能力[J]. 中国组织工程研究, 2020, 24(7): 1002-1008.
[7]	岑妍慧, 夏猛, 贾微, 罗伟生, 林江, 陈松林, 陈炜, 刘鹏, 黎明星, 李景云, 李曼莉, 艾丁丁, 蒋云霞. 黄芩素能下调诱捕受体3表达抑制肝癌干细胞的生物学行为[J]. 中国组织工程研究, 2020, 24(7): 1023-1029.
[8]	刘群, 孙东东, 高丽兰, 何志江, 孙明林. 经皮椎体后凸成形后再发骨折相关因素的Meta分析[J]. 中国组织工程研究, 2020, 24(6): 976-984.
[9]	和雨洁, 王海燕, 李志军, 李筱贺, 蔡永强, 戴丽娜, 许阳阳, 王一丹, 徐雪彬. 学龄期儿童胸椎经“椎弓根-肋骨”单元内固定的数字化测量[J]. 中国组织工程研究, 2020, 24(6): 869-876.
[10]	严舒, 卢岩, 欧阳昭连. 中国组织工程领域2013至2018年国家自然科学基金资助项目分析[J]. 中国组织工程研究, 2020, 24(5): 731-735.
[11]	宋世雷, 陈跃平, 章晓云. PI3K/AKT信号通路调控股骨头坏死的相关机制[J]. 中国组织工程研究, 2020, 24(3): 408-415.
[12]	孙健, 方超, 高飞, 魏来福, 钱军. 长节段与短节段内固定治疗退变性脊柱侧弯疗效与并发症的Meta分析[J]. 中国组织工程研究, 2020, 24(3): 438-445.
[13]	高阳阳, 车先达, 韩鹏飞, 梁斌, 李鹏翠. 透视引导与机器人辅助椎弓根置钉效果的荟萃分析[J]. 中国组织工程研究, 2020, 24(3): 446-452.
[14]	张健, 王小健, 秦德安, 赵中涛, 梁庆元, 安奇君, 宋洁富. 脊柱矫形后发生近端交界性后凸危险因素的荟萃分析[J]. 中国组织工程研究, 2020, 24(3): 460-468.
[15]	梁晨亮, 赵振群, 刘万林. OPG/RANKL/RANK信号通路在骨巨细胞瘤发病机制中的作用[J]. 中国组织工程研究, 2020, 24(23): 3723-3729.